мук 1890 чувствительности к антибиотикам

Мук 1890 чувствительности к антибиотикам

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ
К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии (Н.А.Семина, С.В.Сидоренко); Государственным научным центром по антибиотикам (С.П.Резван, С.А.Грудинина); Научно-исследовательским институтом антимикробной химиотерапии Смоленской государственной медицинской академии (Л.С.Страчунский, О.У.Стецюк, Р.С.Козлов, М.В.Эйдельштейн); Кафедрой микробиологии и химиотерапии Российской медицинской академии последипломного образования (Е.А.Ведьмина, Л.Г.Столярова, И.В.Власова); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (З.С.Середа).

3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН «Методических указаний по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков», утв. Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР В.Е.Ковшило 10 марта 1983 г. N 2675-83.

1. Область применения

1.1. В настоящих методических указаниях изложены стандартные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (методы серийных разведений и диско-диффузионный метод).

1.2. Методические указания предназначены для применения в микробиологических лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы и здравоохранения.

2. Общие сведения

Однако внедрение в клиническую практику значительного количества новых АБП и появление новых механизмов антибиотико-резистентности у микроорганизмов потребовало более строгой стандартизации процедуры тестирования, разработки новых подходов к интерпретации результатов, внедрения современной системы внутреннего контроля качества на каждом этапе исследования.

В настоящих методических указаниях систематизированы современные подходы к определению чувствительности бактериальных возбудителей инфекционных заболеваний человека, учитывающие рекомендации Европейского комитета по определению чувствительности к антибиотикам, а также Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам США.

Исследования чувствительности микроорганизмов к АБП осуществляются для решения следующих задач:

— обоснование целенаправленной индивидуальной антибактериальной терапии для лечения конкретной инфекционной болезни отдельным пациентам;

— обоснование эмпирической терапии отдельных нозологических форм инфекционных болезней в пределах лечебных учреждений или географических регионов;

— осуществление наблюдения за распространением антибиотико-резистентности в отдельных учреждениях или географических регионах;

— исследование новых химических соединений на наличие антибактериальной активности.

3. Показания для исследования чувствительности микроорганизмов
к антибактериальным препаратам

В ходе повседневной деятельности в бактериологических лабораториях из различных биологических материалов и объектов внешней среды выделяют множество бактерий, относящихся к различным таксономическим группам. Однако определение чувствительности выделенных микроорганизмов к АБП показано далеко не во всех случаях. Определение показаний для исследования чувствительности микроорганизмов к АБП является обязанностью врача-бактериолога.

Определять чувствительность к АБП представителей нормальной микрофлоры человека, при их выделении из естественных мест обитания, бактерий, выделенных из объектов внешней среды, за исключением случаев проведения специальных исследований, нецелесообразно.

Обязательному исследованию на чувствительность к АБП подлежат все микроорганизмы, выделенные из первично стерильных жидкостей, органов и тканей человека. В остальных случаях оценке чувствительности должна предшествовать оценка клинической значимости выделенного микроорганизма.

Определение чувствительности выделенного штамма микроорганизма показано, если уровень его устойчивости к АБП не может быть предсказан на основании данных идентификации или вероятной таксономической принадлежности микроорганизма. Практически важной задачей является выявление приобретенной резистентности к АБП у природно-чувствительных к ним микроорганизмов. Подтверждение природной чувствительности или резистентности микроорганизма к АБП не является целью практических исследований.

Исследованию по оценке антибиотикочувствительности подлежат чистые культуры микроорганизмов или материал изолированных колоний с плотных питательных сред после первичного посева образца клинического материала, в последнем случае параллельно необходимо провести идентификацию культуры.

При обнаружении на плотных питательных средах после первичного посева смешанной культуры исследовать антибиотикочувствительность до идентификации и оценки этиологической значимости отдельных микроорганизмов нецелесообразно.

Прямое определение чувствительности с использованием клинического материала (без выделения чистой культуры) возможно только в исключительных случаях при условии подтверждения однородности культуры и высокой степени обсемененности при окраске по Граму, причем исследование следует повторить после выделения чистой культуры микроорганизма.

Следует уделять особое внимание определению чувствительности микроорганизмов, относящихся к таксономическим группам, для которых характерна высокая частота распространения приобретенной резистентности.

Факты выявления резистентности у микроорганизмов, для которых этот феномен ранее не был описан в научной литературе, следует оценивать с крайней осторожностью и рекомендуется обращаться за консультациями в лаборатории, занимающиеся изучением антибиотико-резистентности.

Не следует в практических целях исследовать микроорганизмы, для которых методы определения чувствительности в настоящее время не стандартизованы и отсутствуют критерии интерпретации результатов. Результаты, полученные в данном случае, не могут служить основанием для назначения антибактериального препарата, если соответствующая нозологическая форма не приведена в утвержденной инструкции по его применению.

4. Методы определения чувствительности микроорганизмов
к антибактериальным препаратам

4.1. Общая характеристика методов

Современные стандартизованные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП подразделяют на методы серийных разведений и диффузионные.

Для определения МПК заданные концентрации АБП вносят в питательную среду, которую затем засевают культурой исследуемого микроорганизма и после инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста.

В зависимости от характера используемой питательной среды различают методы серийных разведений в агаре или в бульоне. В зависимости от объема используемой жидкой питательной среды выделяют методы серийных макро- и микроразведений.

Разновидностью метода серийных разведений является также метод, основанный на использовании только двух концентраций АБП, соответствующих пограничным значениям МПК (см. ниже). Этот принцип исследования широко используется в автоматизированных системах для определения чувствительности микроорганизмов.

Диффузионные методы определения чувствительности основаны на диффузии АБП из носителя в плотную питательную среду и подавлении роста исследуемой культуры в той зоне, где концентрация АБП превосходит МПК.

В настоящее время существуют две основные модификации диффузионного метода: диско-диффузионный и Е-тест.

В диско-диффузионном методе в качестве носителя АБП используют бумажный диск. Образование зоны подавления роста происходит в результате диффузии АБП из носителя в питательную среду. В определенных пределах величина диаметра зоны подавления роста обратно пропорциональна МПК. Однако диско-диффузионный метод позволяет лишь косвенно судить о величине МПК, а результатом исследования является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности (чувствительный, промежуточный или резистентный).

Е-тест представляет собой узкую полоску полимера (0,5х6,0 см), на которую нанесен градиент концентраций АБП (от минимальных до максимальных). Подавление роста микроорганизма вокруг полоски Е-теста происходит только в той зоне, где концентрация АБП, диффундирующего из носителя, выше МПК, при этом образуется каплевидная зона ингибиции. Значения концентрации АБП в каждом участке носителя типографским способом нанесены на наружной (обращенной к исследователю) поверхности Е-теста. Величину МПК учитывают в том месте, где граница зоны подавления роста вплотную подходит к носителю. Детальные инструкции по определению чувствительности с использованием Е-тестов прилагаются изготовителем к набору реактивов.

4.1.1. Основные этапы проведения тестирования

Оценка антибиотикочувствительности, независимо от конкретного метода, предполагает последовательное выполнение нескольких этапов:

— приготовление питательных сред;

— приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма);

— учет и интерпретация результатов, формулировка рекомендаций по лечению.

Диффузионные методы включают также этап наложения дисков или полосок Е-теста на плотную питательную среду.

4.1.2. Приготовление питательных сред для определения чувствительности

Для оценки чувствительности используют специально предназначенные для этой цели среды, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке и по своим характеристикам удовлетворяющие требованиям, приведенным в разделе 5. Внутрилабораторный контроль качества среды проводят при использовании всех сред, разрешенных к применению в Российской Федерации в установленном порядке.

Вид питательной среды для оценки чувствительности определяют выбранным методом проведения исследования (агар или бульон), а также видом тестируемого микроорганизма.

Выбранную питательную среду для определения чувствительности готовят из сухой среды промышленного производства в соответствии с инструкцией изготовителя. После автоклавирования питательную среду сразу же разливают в стерильные пробирки или в чашки Петри, или (если необходимо) колбы со средой помещают на водяную баню при 48-50 °С, где выдерживают до достижения указанной температуры, после чего в них асептически вносят термолабильные питательные добавки и/или рабочие растворы антибиотиков, а затем разливают в пробирки или в чашки Петри.

4.1.3. Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма)

Общим и принципиально важным для всех методов тестирования является стандартизация суспензии исследуемого микроорганизма, ее концентрация должна составлять 1,5·10 КОЕ/мл. Практически наиболее приемлемым методом оценки концентрации бактериальной суспензии является измерение ее оптической плотности. Оптическая плотность бактериальной суспензии с концентрацией 1,5·10 КОЕ/мл при визуальном контроле соответствует стандарту мутности 0,5 по МакФарланду. Контроль оптической плотности суспензии можно также осуществлять спектрофотометрически (денситометрически). Существуют коммерчески доступные стандарты мутности и спектрофотометры. Бактериальную суспензию можно готовить либо из бульонной, либо из агаровой культуры.

Приготовление инокулюма из агаровой культуры

Для приготовления инокулюма используют чистую суточную культуру микроорганизмов, выросших на плотных питательных средах. Отбирают несколько однотипных, четко изолированных колоний, выросших на неселективных плотных питательных средах. Петлей переносят незначительное количество материала с верхушек колоний в пробирку со стерильным физиологическим раствором или питательным бульоном, доводя плотность инокулюма точно до 0,5 по стандарту МакФарланда. Инокулюм следует использовать в течение 15 мин после приготовления.

Приготовление инокулюма из бульонной культуры

При определении чувствительности быстро растущих бактерий с обычными питательными потребностями для приготовления инокулюма также можно использовать 5-6-часовую бульонную культуру микроорганизма. Для этого отбирают несколько однотипных изолированных колоний, петлей переносят незначительное количество материала в пробирку с 4,0-5,0 мл жидкой неселективной питательной средой. Инкубируют при 35 °С. Через 5-6 ч инкубации плотность микробной суспензии приблизительно соответствует необходимой, и ее точно доводят до 0,5 по МакФарланду путем добавления стерильного бульона или физиологического раствора.

Стандарт МакФарланда может быть либо приобретен, либо приготовлен в лаборатории.

4.1.4. Приготовление стандарта 0,5 по МакФарланду

К 0,5 мл раствора ВаСl в концентрации 0,048 моль/л (1,175% раствор ВаСl ·2H O) медленно при тщательном перемешивании добавить 99,5 мл раствора H SO в концентрации 0,18 моль/л (1%) до получения гомогенной суспензии.

Правильность приготовления суспензии необходимо проверить на спектрофотометре. Поглощение при использовании кюветы 1 см должно составить 0,08-0,10 при длине волны 625 нм.

Полученную суспензию необходимо разлить по 4-6 мл в пробирки с герметично закрывающимися крышками. Пробирки должны быть такого же диаметра, как и используемые для приготовления бактериальной суспензии.

Хранить пробирки с суспензией необходимо в темноте при комнатной температуре.

Перед использованием пробирки необходимо тщательно встряхивать и оценивать однородность суспензии. При появлении видимых частиц пробирки изымаются из употребления.

Стандарт мутности необходимо обновлять или проверять его оптическую плотность ежемесячно.

4.2. Методы серийных разведений

4.2.1. Приготовление растворов АБП для методов серийных разведений

Источник

МУК 4.2.1890—04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам.

1.1. В настоящих методических указаниях изложены стандартные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (методы серийных разведений и диско-диффу­зионный метод).

1.2. Методические указания предназначены для применения в микробиологических лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы и здравоохранения.

Определение чувствительности микроорганизмов – возбудителей инфекционных заболеваний человека к антибактериальным препаратам (АБП) – приобретает все более важное значение в связи с появлением и широким распространением антибиотико-резистентности у бактерий. Стандартные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП (диско-диффузионный и серийных разведений) были разработаны во второй половине 60-х – начале 70-х годов ХХ века и с тех пор с методической точки зрения не претерпели принципиальных изменений.

Однако внедрение в клиническую практику значительного количества новых АБП и появление новых механизмов антибиотико-резис­тентности у микроорганизмов потребовало более строгой стандартизации процедуры тестирования, разработки новых подходов к интерпретации результатов, внедрения современной системы внутреннего контроля качества на каждом этапе исследования.

В настоящих методических указаниях систематизированы современные подходы к определению чувствительности бактериальных возбудителей инфекционных заболеваний человека, учитывающие рекомендации Европейского комитета по определению чувствительности к антибиотикам, а также Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам США.

Исследования чувствительности микроорганизмов к АБП осуществляются для решения следующих задач:

Источник

Мук 1890 чувствительности к антибиотикам

Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам: настоящее и будущее

Домотенко Л. В., канд. хим. наук, зав. лабораторией разработки питательных сред,

Косилова И. С., м.н.с. лаборатории разработки питательных сред,

Шепелин А. П., д-р биол. наук, зам. директора по научно-производственной деятельности

ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора, п. Оболенск, Московская область

Одной из основных функций лабораторий клинической микробиологии является определение чувствительности клинически значимых бактериальных изолятов к антимикробным препаратам. Результаты определения используются при выборе этиотропной терапии для лечения конкретного пациента. Они необходимы также для получения эпидемиологических данных о структуре резистентности возбудителей внебольничных и нозокомиальных инфекций, которые впоследствии становятся основой для эмпирического назначении антимикробных препаратов.

Актуальность определения чувствительности в современных условиях особенно возрастает в связи со сложившейся ситуацией, связанной с распространением патогенных и условно патогенных микроорганизмов – возбудителей инфекционных болезней, устойчивых к антимикробным препаратам, включая антибиотики. В арсенале врачей практически не остается препаратов выбора: устойчивость возникла даже к карбапенемам, которые являются самыми эффективными препаратами при лечении инфекций, вызываемых устойчивыми анаэробами и энтеробактериями.

Устойчивость к антимикробным препаратам – многогранная проблема, касающаяся всего общества и определяемая множеством взаимосвязанных факторов. Отдельные изолированные усилия малоэффективны. Для борьбы с развитием и распространением устойчивости к антимикробным препаратам необходимы согласованные действия. Появление и распространение антибиотикоустойчивых бактерий усугубляется неправильным назначением и применением антибиотиков. Последствия необоснованного назначения антибиотиков могут навредить не только пациенту (практически 40% всех сообщений о побочных эффектах связаны именно с приемом антибактериальных препаратов), но и всему обществу. Стремительный рост резистентности микробов к существующим лекарственным средствам может оставить будущие поколения без этих лекарств 2.

От микробиологов требуется грамотное выполнение всех звеньев бактериологического исследования: от взятия клинического материала, транспортировки его в бактериологическую лабораторию, идентификации возбудителя до определения его чувствительности к антибиотикам и интерпретации полученных результатов. Исследования, проведенные американскими учеными, показали, что правильное и своевременное выполнение оценки чувствительности микроорганизмов способствует улучшению результатов лечения пациентов путем быстрого обнаружения резистентности и последующего выбора подходящих антимикробных препаратов [3]. До сих пор не существует достаточно быстрого диагностического теста для выбора препарата непосредственно у постели больного.

Современные методы определения чувствительности

В настоящее время увеличивается количество лабораторий, которые применяют молекулярно-генетические методы исследования, основанные на обнаружении специфических генетических маркеров резистентности к антимикробным препаратам. Преимуществом этих методов является высокая скорость получения результатов и высокая стандартность. В литературе обсуждаются вопросы использования масс-спектрометрии и проточной цитометрии для обнаружения резистентности, что позволит сократить время исследования до 1-2 ч. Вибрационные кантилеверы, содержащие бактериальные клетки, являются еще одной новой методологией для выявления устойчивости к противомикробным препаратам [4]. Изотермическая микрокалориметрия применена для обнаружения действия антивомикробных препаратов на бактерии в биопленках [5]. Новым подходом к обнаружению и количественной оценке устойчивости к противомикробным препаратам является использование биосенсоров с покрытыми антителами магнитными микросферами, а также автоматизированной микроскопии иммобилизованных живых бактериальных клеток для обнаружения их роста в присутствии антимикробных препаратов 7. Шведские ученые, применяя специально изготовленный микрофлюидный чип и регистрируя с помощью микроскопа темпы роста бактерий в присутствии антибиотиков, смогли определить чувствительность уропатогенных изолятов Escherichia coli к девяти антибиотикам менее чем за 30 минут [8]. Перечисленные методы, за исключением молекулярных методов – это методы следующего поколения. Многие лаборатории во всем мире для сокращения времени получения результата переходят на автоматический или полуавтоматический формат исследования, используя автоматизированные системы для идентификации и определения чувствительности.

В микробиологических лабораториях нашей страны представлены автоматические бактериологические анализаторы Phоenix (Becton Dickinson), VITEK2 (bioMerieux), WalkAway (Beckman Coulter), Sensititre (Thermo Scientific). Эти новые системы позволяют проводить идентификацию микроорганизмов в среднем за 6-8 ч и определение их чувствительности к антибактериальным препаратам в среднем за 4-10 ч в зависимости от рода микроорганизмов. Тестируемый спектр включает в себя более 200 микроорганизмов. Определение чувствительности проводится к большому числу препаратов (от 18 до 36) в нескольких концентрациях. Результаты могут быть получены как в виде клинических категорий (чувствительный – умеренно-чувствительный – резистентный), так и в виде значений минимально подавляющей концентрации (МПК).

При многочисленных положительных характеристиках использование анализаторов имеет ряд ограничений, связанных, в первую очередь, с тем, что панели (или кассеты) для автоматов содержат фиксированный набор антимикробных препаратов для конкретных групп микроорганизмов, и, во-вторых, невозможно тестировать медленно растущие бактерии. Для них необходимо оценивать чувствительность дополнительными методами: диско-диффузионным или с помощью Е-тестов. Тем не менее, несмотря на высокую цену, перспектива их использования в многопрофильных стационарах очевидна в связи с большим количеством исследований.

Хромогенные среды разработаны около тридцати лет назад для выделения и быстрой идентификации микроорганизмов. Они созданы таким образом, что идентифицируемый микроорганизм в процессе роста с помощью собственных специфических ферментов гидролизует хромогенный субстрат, в результате расщепления которого образуются окрашенные и/или флюоресцирующие продукты. В результате колонии микроорганизмов окрашиваются в определенный цвет или приобретают способность к флюоресценции при ультрафиолетовом облучении.

В последние годы перечень хромогенных сред дополнился средами для скрининга возбудителей инфекций со специфическими фенотипами антибиотикорезистентности. Несколькими компаниями производятся хромогенные среды для обнаружения патогенов со следующими специфическими детерминантами резистентности: MRSA (устойчивый к метициллину S. aureus), VRE (устойчивые к ванкомицину Enterococcus faecium и Enterococcus faecalis), ESBL (продуцирующие β-лактамазу расширенного спектра Enterobacteriaceae и другие грамотрицательные палочки, устойчивые к цефалоспоринам третьего поколения) и CRE (устойчивые к карбапенем Enterobacteriaceae и другие грамотрицательные палочки). Отличительная особенность при работе с данными средами заключается в необходимости предварительного накопления патогена в бульоне, содержащем один или несколько селективных агентов (например, антибиотиков, NaCl). Среды данного назначения не нашли столь широкого применения в нашей стране, но в литературе описано их использование, как при анализе клинического материала, так и пищевых продуктов [9]. Например, при сравнительном исследовании хромогенных сред для выявления MRSA трех производителей их чувствительность находилась в пределах 83,6-89,0%, а специфичность – 92,1-98,6% [10]. Чувствительность и селективность сред для обнаружения VRE варьировалась от 80 до 98,6% в зависимости от фирмы-изготовителя, а специфичность – от 79,4 до 100% [11].

Золотым стандартом определения чувствительности остается метод последовательных разведений в бульоне, регламентированный международным стандартом ISO 20776-1:2006 и ГОСТ Р ИСО 20776-1-2010. Описанию методики проведения тестирования посвящено много публикаций. Здесь только отметим, что все вновь разрабатываемые методы и системы при регистрации проходят оценку в сравнительных исследованиях именно с данным методом. FDA

в США даже разработала требования к специальным критериям сравнения при внедрении новых систем. Так, например, частота обнаружения очень больших ошибок (ложная чувствительность) должна составлять

Диффузионные методы – наиболее широко используемые методы – объединяют диско-диффузионный метод (ДДМ) и метод градиентной диффузии антимикробных препаратов в агар. Диффузионные методы традиционно выполнялись вручную, но в течение последних двух десятилетий разработаны полуавтоматические коммерческие устройства для регистрации результатов как для ДДМ, так и для метода градиентной диффузии.

Метод градиентной диффузии антимикробных препаратов в агар (или эпсилометрический метод, или метод Е-тестов)

Метод градиентной диффузии для тестирования чувствительности, в нашей стране известный как метод Е-тестов или эпсилометрический метод, выполняется с помощью стандартных пластиковых полосок. На нижней поверхности полосок нанесен антимикробный препарат с экспоненциально убывающим градиентом концентрации (примерно 15 концентраций), например, от 256 до 0,016 мкг/мл. На верхней поверхности полосок нанесена шкала значений МПК. Первые полоски выпускались под названием Etest фирмой AB Biodisk (затем bioMérieux), в последние годы появились полоски MIC Evaluator (M.I.C.E.) (Oxoid). Процедура тестирования с помощью полосок заключается в размещении полосок на агаровую среду (как правило, агар Мюллера-Хинтон), засеянных стандартной суспензией тестируемого микроорганизма (108 КОЕ/мл), аналогичной той, которая используется в процедуре диско-диффузионного метода. Через 16-18 ч инкубации при температуре 35°С образуется зона подавления роста микроорганизма в виде эллипса из-за градиента концентраций антибиотика. Подавление роста вокруг полоски происходит только в той зоне, где концентрация антибиотика выше МПК. Значение МПК регистрируется на пересечении эллипсовидной зоны подавления роста с краем полоски. По полученным значениям МПК, используя интерпретационные таблицы, определяют клиническую категорию тестируемого штамма. Многочисленные исследования антибиотикочувствительности большого набора грамположительных и грамотрицательных бактерий, проведенные с использованием Etest, продемонстрировали хорошее совпадение результатов с референтным методом микроразведений в бульоне 13.

Метод градиентной диффузии антимикробных препаратов в агар при сравнительной простоте использования позволяет получать количественные данные, тестировать широкий набор микроорганизмов, включая микроорганизмы со сложными питательными потребностями (стрептококки, пневмококки, гемофилы, гонококки, анаэробы и др.), но из-за дороговизны не получил широкого распространения.

Диско-диффузионный метод является одним из старейших и остается наиболее используемым методом оценки чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам в обычных бактериологических лабораториях. Он подходит для исследования большинства бактериальных патогенов, в том числе и для наиболее распространенных бактерий со сложными питательными потребностями. Метод является универсальным для широкого круга антимикробных препаратов и не требует обязательного использования специального оборудования.

Для получения достоверных результатов необходимо четко следовать методике, описанной в нормативных документах. До 2014 года единственным документом, регламентирующим процедуру тестирования, являлись “Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам” МУК 4.2.1890-04, которые базируются на требованиях стандарта M100 CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute – Институт клинических и лабораторных стандартов, США).

В соответствии с требованиями МУК 4.2.1890-04 для тестирования чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом можно использовать любую среду данного назначения, разрешенную к применению на территории РФ. Для микроорганизмов с обычными питательными потребностями это могут быть среды: АГВ, питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, Мюллера-Хинтон агар (МХА), изосенситест и др. Для микроорганизмов со сложными питательными потребностями рекомендуются две питательные среды: специальная питательная среда Haemophilus Test Medium – для тестирования H. influenzae, а для остальных (Streptococcus pneumoniae, стрептококки групп A, B, C, G, и др.) – МХА с добавлением 5% бараньей крови.

В 2014 г. утверждены клинические рекомендации “Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам”, которые ориентированы на методологию в оценке чувствительности и интерпретации результатов, предлагаемую Европейским комитетом по определению чувствительности к антимикробным препаратам (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing – EUCAST) и являются переводом документов EUCAST. В соответствии с требованиями клинических рекомендаций для анализа чувствительности микроорганизмов с обычными питательными потребностями может быть использована только одна питательная среда. Этой средой является агар Мюллера-Хинтон. Для тестирования микроорганизмов со сложными питательными потребностями рекомендована единая среда для Streptococcus spp. и для Haemophilus influenzae, и др. – агар МХА с добавлением 5% дефибринированной лошадиной крови и 20 мг/л β-никотинамидадениндинуклеотида (β-НАД).

Три года, прошедшие после утверждения обсуждаемых клинических рекомендаций, на наш взгляд, стали переходными. В этот период многие лаборатории стали постепенно внедрять в свою практику требования клинических рекомендаций. Но еще много лабораторий работают по требованиям МУК 4.2.1890-04. Конечно, ряд технических трудностей, связанных, в основном, со сложностью приобретения агара Мюллера-Хинтон надежных фирм-производителей в период экономического кризиса и отсутствием на российском рынке доступной лошадиной крови, ограничивал использование нового нормативного документа.

В настоящее время ситуация меняется. Уже стала доступна дефибринированная лошадиная кровь как отечественного, так и импортного производства. В ФБУН ГНЦПМБ разработана технология производства агара Мюллера-Хинтон II и организовано его производство. Питательная среда зарегистрирована как медицинское изделие в Росздравнадзоре (РУ № РЗН 2017/5962).

Несмотря на большое количество методов, на сегодняшний день не существует методов, которые позволили бы с абсолютной достоверностью прогнозировать клинический эффект антибиотиков при лечении инфекционных болезней. В то же время, результаты определения чувствительности могут служить хорошим ориентиром клиницистам для выбора и коррекции антибактериальной терапии. Выбор методов определения определяются традициями и возможностями каждой отдельной лаборатории.

Список использованной литературы

1. WHO (April 2014). «Antimicrobial resistance: global report on surveillance 2014». WHO. Retrieved May 9, 2015.

2. Домотенко, Л.В. Лабораторная диагностикачувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам / Л.В. Домотенко, А.П. Шепелин // Справочник заведующего КДЛ. – 2017. – № 8. – С. 8-16.

3. Manual of Commercial Methods in Clinical Microbiology: International Edition, Second Edition, Allan L. Truant (Editor-in-Chief). – Wiley-Blackwell – 2016. – 612 p.

4. van Belkum, A. Next-generation antimicrobial susceptibility testing / A. van Belkum, W. M. Dunne // Journal of Clinical Microbiology. – 2013. – V. 51. – P. 2018–2024.

5. Von Ah, U. Isothermal micro-calorimetry – a new method for MIC determinations: results for 12 antibiotics and reference strains of Escherichia coli and Staphylococcus aureus / Ah. U. Von, U., D. Wirz, A. U. Daniels. – BMC Microbiology. – 2009. – V. 9: 106. doi: 10.1186/1471-2180-9-106.

6. Kinnunen, P. Self-assembled magnetic bead biosensor for measuring bacterial growth and antimicrobial susceptibility testing / P. Kinnunen,

B. H. McNaughton, T. Albertson, I. Sinn, S. Mofakham, R. Elbez, D. W. Newton, A. Hunt, and R. Kopleman // Small. – 2012. – V. 8. – P. 2477–2482.

7. Price, C. S. Rapid antibiotic susceptibility phenotypic characterization of Staphylococcus aureus using automated microscopy of small numbers of cells / C.S. Price, S. E. Kon, S. Metzger // Journal of Microbiological. Methods – 2014. – V. 98. – P. 50–58.

8. Baltekina, Ö. Antibiotic susceptibility testing in less than 30 min using direct single-cell imaging / Ö. Baltekina, A. Boucharina, E. Tanob, D. I. Anderssonc, J. Elf // PNAS. – 2017. – V. 114, N. 34. – p. 9170–9175.

9. Randall, L.P. Evaluation of meat, fruit and vegetables from retail stores in five United Kingdom regions as sources of extended-spectrum beta-lactamase (ESBL)-producing and carbapenem-resistant Escherichia coli / L.P. Randall, M.P. Lodge, N.C. Elviss, F.L. Lemma, K.L. Hopkins,

C.J. Teale, N. Woodford // International Journal of Food Microbiology. – 2017. – V. 16, No. 241. – P.283-290.

10. Denys, G. A. Three way comparison of BBL CHROMagar MRSA II, MRSASelect, and Spectra MRSA for detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates in nasal surveillance cultures / G.A. Denys, P.B. Renzi, K.M. Koch, and C.M. Wissel. // Journal of Clinical Microbiology. – 2013. – V. 51. – P. 202–205.

11. Johnson, J. K. Current rapid screening methods for gastrointestinal colonization of vancomycin-resistant enterococci / J. K. Johnson, D. Cashara // Clinical Microbiology Newsletter. – 2013. – V. 35. – P. 45–51.

12. Luber, P. Comparison of Broth Microdilution, E Test, and Agar Dilution Methods for Antibiotic Susceptibility Testing of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli / P. Luber, E. Bartelt, E. Genschow, J. Wagner, H. Hahn // Journal of Clinical Microbiology. – 2003. – V. 41, No. 3. P. 1062–1068.

13. Mayrhofer, S. Comparison of Broth Microdilution, Etest, and Agar Disk Diffusion Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Lactobacillus acidophilus Group Members //S. Mayrhofer, K. J. Domig, C. Mair, U. Zitz, G. Huys, W. Kneifel // Applied and Environmental Microbiology. – 2008. – V. 74, No.12. – P. 3745–3748.

14. Amsler, K. Comparison of Broth Microdilution, Agar Dilution, and Etest for Susceptibility Testing of Doripenem against Gram-Negative and Gram-Positive Pathogens / K. Amsler, C. Santoro, B. Foleno, K. Bush, R. Flamm // Journal of Clinical Microbiology. – 2010. – V. 48, No. 9. – P. 3353-3357.

ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора

Федеральное бюджетное учреждение науки “Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии” Роспотребнадзора

142279, Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск

Тел.: +7 (4967) 36-00-03, +7 (4967) 36-00-10

Источник