определение бгкп в мясе
ТЕМА 1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СВЕЖЕГО МЯСА
1.1. Микрофлора свежего мяса
На мясоперерабатывающих предприятиях микробиологическое исследование мяса и мясных продуктов проводят с профилактической целью или как вынужденное, когда требуется выявить в мясе присутствие патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, а также при подозрении на нарушения в ходе технологического процесса. Микробиологическому исследованию подвергают сырье, готовые изделия, а также тару, инвентарь, руки рабочих, непосредственно связанных с мясной продукцией.
Микроорганизмы, как правило, не содержатся в крови, мышечной ткани и во внутренних органах здоровых животных, организм которых обладает высокой сопротивляемостью к их проникновению. Существуют два пути контаминации органов и тканей животных микроорганизмами: эндогенный и экзогенный.
Эндогенная контаминация мяса микробами наблюдается у животных, больных инфекционными болезнями, что представляет большую опасность для человека, а также у ослабленных и утомленных животных. У животных, убитых в стадии резкого утомления, микроорганизмы содержатся практически во всех органах и тканях.
Экзогенная контаминация мяса и органов микроорганизмами происходит после убоя в процессе последующих операций (снятие шкуры, разделка и нутровка туши) и в ходе заключительной обработки мяса.
Мясо может быть контаминировано и токсикогенными микроорганизмами, например, Clostridium perfringens, Salmonella typhimurium, Bacillus cereus, энтерококками. При значительном размножении этих бактерий мясо может послужить причиной пищевых отравлений.
Бактериологическое исследование мяса и мясопродуктов проводится для предупреждения:
✵ заражения рабочих, занимающихся убоем скота и переработкой мяса;
✵ допуска в пищу мяса и мясопродуктов, полученных от животных, имевших инфекционные заболевания;
✵ выпуска в реализацию продуктов, употребление которых может вызвать у людей пищевые токсикоинфекции или токсикозы, а также распространение инфекций.
Микробиологические анализы осуществляют в бактериологической лаборатории предприятия в соответствии с действующими ГОСТами или нормативно-технической документацией. Микробиологическое исследование свежего мяса начинают с микроскопического исследования мазков-отпечатков (бактериоскопический метод), а затем проводят бактериологический анализ.
1.2. Бактериоскопическое исследование мяса
Отбор проб. Для определения свежести мяса от каждой туши или полутуши отбирают для исследования три образца массой не менее 200 г каждый целым куском из мышц бедра, лопатки и области 4-5 шейных позвонков. В образцах, кроме мышечной ткани, должны быть сухожилия и жир.
Для исследования на листериоз направляют головной мозг, долю печени и почку.
При исследовании полутуши и четверти туши берут кусок мышцы, лимфатические узлы и трубчатую кость.
Каждый образец упаковывают отдельно в пергаментную бумагу, ставят дату, место взятия проб, вид животного, номер туши, причину и цель исследования и отправляют в лабораторию.
Бактериоскопическое исследование мяса проводят в случае расхождения результатов между биохимическими и органолептическими методами оценки. Необходимость в бактериоскопическом исследовании свежести мяса отпадает в случае отрицательного результата при органолептическом анализе.
Из каждой пробы мяса необходимо приготовить не менее двух мазков-отпечатков.
Для приготовления мазка-отпечатка из поверхностного слоя (на глубине 2-3 см) стерильными ножницами или скальпелем вырезают кусочек мяса массой 2-3 г, прикладывают его внутренней срезанной стороной к предварительно профламбированной поверхности предметного стекла.
Для приготовления мазков-отпечатков из глубоких слоев поверхность пробы мяса необходимо сначала простерилизовать (смочить спиртом и обжечь на пламени или прижечь нагретым металлическим шпателем). Затем стерильным инструментом вырезать из глубины небольшие кусочки мяса размером 2 x 1,5 x 2,5 см и сделать мазки-отпечатки.
Приготовленные на предметных стеклах мазки-отпечатки необходимо высушить на воздухе, зафиксировать в пламени горелки или спиртовки и окрасить по методу Грама. Каждый мазок-отпечаток просмотреть под микроскопом с иммерсионным объективом не менее чем в 25 разных полях зрения.
При микроскопировании подсчитывают отдельно число клеток бактерий (кокков и палочек) и дрожжей в каждом просмотренном поле зрения, результатом является среднее значение общего количества клеток по двадцати пяти полям зрения. Отмечают также наличие или отсутствие следов распада мышечной ткани в поле зрения микроскопа. Результаты микроскопирования оценивают в соответствии с данными, представленными в табл. 1.1.
Таблица 1.1. Оценка результатов бактериоскопического анализа мяса
Отсутствуют микробные клетки или видны единичные кокки и дрожжи (до 10 клеток); следов распада мышечной ткани нет
С частично измененной свежестью
Не более 30 кокков, дрожжей или палочковидных клеток; заметны следы распада мышечной ткани (ядра мышечных волокон в состоянии распада, исчерченность мышечных волокон слабо различима)
Более 30 микробных клеток с преобладанием палочковидных форм; наблюдается значительный распад мышечной ткани, почти полное исчезновение ядер и исчерченности мышечных волокон
Примечание. При обнаружении в мазках-отпечатках грамположительных палочек с обрубленными концами последние окрашивают 2 %-м раствором сафранина. Наличие в мазках, окрашенных сафранином, палочек или цепочек с капсулами свидетельствует о присутствии возбудителя сибирской язвы.
1.3. Бактериологическое исследование мяса
При отсутствии в мазках-отпечатках бактерий, похожих на сибиреязвенные, из образцов мяса и субпродуктов проводят посевы на питательные среды для выявления в них возбудителей пищевых токсикоинфекций (бактерий родов Escherichia, Proteus, Salmonella), возбудителей зооантропонозов (бацилл сибирской язвы, бактерий листериоза, рожи свиней и др.) и анаэробов (патогенных и токсикогенных клостридий).
1.3.1. Определение общего количества микроорганизмов (КМАФАнМ)
По 1 см 3 каждого разведения засевают в чашки Петри с заранее маркированной крышкой и заливают 10 — 15 см 3 расплавленного и остуженного до температуры 40 — 45 °С мясопептонного агара (МПА). Сразу после заливки агара содержимое чашек Петри тщательно перемешивают путем легкого покачивания для равномерного распределения посевного материала. После застывания агара чашки Петри переворачивают крышками вниз и ставят в таком виде на 72 ч в термостат с температурой 37 °С.
По окончании культивирования подсчитывают количество выросших на чашках с МПА колоний. При этом используют лупу с увеличением в 4 — 10 раз или пользуются специальным прибором для подсчета колоний. При большом числе колоний и их равномерном распределении в агаре на дно чашки Петри наносят четыре или более одинаковых секторов, подсчитывают число колоний в двух-трех секторах (но не менее чем на 1/3 поверхности чашки), находят среднее арифметическое число колоний и умножают на общее количество секторов всей чашки.
Количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов в 1 см3 свежего мяса (X) вычисляют по формуле
1.3.2. Определение бактерий группы кишечной палочки (БГКП)
В настоящее время к БГКП относят следующие роды из семейства Enterobacteriaceae: Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia.
Метод определения БГКП основан на обнаружении образования газа или кислоты в элективной питательной среде, содержащей лактозу (среды Кесслера, Хейфеца, Кода). Метод учета БГКП получил название бродильного метода, сущность которого заключается в посеве определенного количества продукта или его разведений в жидкую питательную среду с последующим инкубированием при температуре 37 °С и обнаружении в поплавках газа с изменением цвета среды.
При обнаружении газа в пробирках на втором этапе исследования, производят пересев материала из забродивших пробирок на среду Эндо. Пересев делается бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированной колонии. Чашки Петри с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч, затем посевы просматривают. На среде Эндо БГКП вырастают, образуя яркокрасные блестящие колонии с металлическим блеском (или без него).
При отсутствии на среде Эндо характерных для БГКП яркокрасных колоний с металлическим блеском или без него дают отрицательный ответ на наличие кишечных палочек и исследование прекращают. При обнаружении на среде Эндо типичных для БГКП колоний устанавливается принадлежность выросших микроорганизмов к семейству кишечных бактерий. Для этого проводят тест на оксидазу (для БГКП она должна быть отрицательной). Затем из колоний, характерных для кишечных палочек, готовят фиксированный препарат, окрашивают его по Граму и микроскопируют. Под микроскопом должны обнаруживаться мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. В этом случае ответ на присутствие БГКП в продукте считается положительным.
1.3.3. Обнаружение бактерий рода Proteus
Присутствие в свежем мясе бактерий рода Proteus в больших количествах свидетельствует о наличии гнилостного разложения мясных белков.
Для обнаружения протея в мясе и мясопродуктах проводят посев по Шукевичу: соскоб с поверхности свежего разреза исследуемого образца вносят в конденсационную воду свежескошенного МПА в пробирках, не касаясь поверхности среды. Пробирки в вертикальном положении помещают на 18-24 ч в термостат с температурой 37 °С. Наличие на среде в пробирках вуалеобразного налета, при микроскопировании которого обнаруживают подвижные палочки, отрицательно окрашивающиеся по Граму, указывает на присутствие протея в исследуемых образцах.
Биохимические свойства видов бактерий рода Proteus приведены в табл. 1.2.
Таблица 1.2. Биохимические свойства бактерий рода Proteus
Определение бгкп в мясе
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ
Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
Poultry meat, edible offal and ready to cook products. Methods for detection and quantity determination of coliform bacteria
Дата введения 2012-07-01
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПП Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»
ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 8, 2012 год
Поправка внесена изготовителем базы данных
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 7218-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории
ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред
ГОСТ Р 50396.0-92 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям
ГОСТ Р 52816-2007 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
ГОСТ Р 53597-2009 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
ГОСТ 29184-91* Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
ГОСТ 30425-97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности
3 Термины, определения и сокращения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52816, а также следующие сокращения.
4 Сущность методов
Метод выявления колиформных бактерий основан на высеве определенного количества продукта и (или) его разведения в жидкую среду с лактозой, термостатировании при температуре (37±1) °С в течение (48±2) ч, подтверждении принадлежности, при необходимости, выросших микроорганизмов по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам к колиформным бактериям.
Метод определения количества колиформных бактерий методом НВЧ основан на высеве определенного количества продукта и (или) его последовательных разведений в жидкую селективную среду с лактозой; термостатировании, учете положительных пробирок, подтверждении принадлежности, при необходимости, по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам выросших микроорганизмов к колиформным бактериям. Метод определения наиболее вероятного числа колиформных бактерий предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.
Методы определения количества колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его последовательных разведений в/на агаризованную селективно-диагностическую среду с лактозой, термостатировании, подсчете типичных и атипичных колоний, подтверждении принадлежности по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам выросших микроорганизмов к колиформным бактериям.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 или в 1 см жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц колиформных бактерий.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см жидкого продукта более 150 колониеобразующих единиц колиформных бактерий.
5 Общие положения
5.2 Требования безопасности
6 Средства измерений, аппаратура, материалы, культуральные среды и реактивы
6.2 Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также материалов, реактивов, по качеству не ниже указанных в 6.1.
7 Подготовка к проведению испытаний
7.1 Отбор и подготовка проб
7.4 Подготовка и приготовление культуральных сред, растворов реактивов
7.4.1 Селективная обогатительная среда (лаурил сульфат триптозный бульон) по ГОСТ Р 52816.
7.4.2 Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 52816.
7.4.4 Среда Кесслера с лактозой по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 52816.
7.4.5 Среда Хейфица по ГОСТ Р 50396.0.
7.4.6 Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар (VRBL-агар) по ГОСТ Р 52816.
7.4.7 Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным по ГОСТ Р 52816.
7.4.9 Среда Гисса с лактозой по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ 10444.1.
7.4.10 ГРМ-агар (сухой питательный агар на основе гидролизата рыбной муки для культивирования бактерий) по ГОСТ Р 52816.
7.4.11 Мясо-пептонный агар по ГОСТ Р 50396.0.
7.4.12 Реактивы для окраски по Граму по ГОСТ 10444.1.
7.4.13 Диски индикаторные бумажные для определения оксидазы.
7.4.14 Реактивы для теста Григорсена по ГОСТ Р 52816.
7.4.15 Допускается использование других культуральных селективно-диагностических сред, в том числе хромогенных, разрешенных и предназначенных для выявления и определения колиформных бактерий.
7.4.16 Приготовление и правила использования культуральных сред промышленного производства проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-2.
ГОСТ Р 54374-2011 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
Текст ГОСТ Р 54374-2011 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ
МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ
Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
Стандарта кформ 2012
Предисловие
Цели и принципы стандартизации е Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0—2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПП Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 5 августа 2011 г. N9 219-ст
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуются в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии е сети Интернет
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства ло техническому регулированию и метрологии
Поправка к ГОСТ Р 54374— 2011 Мясо ггпиш, субпродукты н полуфабрикаты нг мяса птицы. Методы выявления и определения количества бактерий группы вишенных палочек (колмформнмх бактерий)
Настоящий стандарт распространяется на мясо птицы, субпродукты п полуфабрикаты из мяса птицы (дшсс — продукт) н ухгтана ни и ме i
Настоящий стандарт распространяется на мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса (шшы. а также жир-сы-реи пгииы (далее — продукт) и устанавливает
(ИУС№ 82012 г.)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ
Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек
Poultry meet, edibte offal end ready to cook products. Methods for detection and quantity determination
of conform bacteria
Дата введения — 2012—07—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы (далее — продукт) и устанавливает методы наиболее вероятного числа, посева в/на агаризованные селективно-диагностические среды для выявления и определения количества бактерий груллы кишечных лапочек (колиформных бактерий родов Escherichia. Citrobacter. Enterobacter. Klebsiella, Serratia) (далее — колиформные бактерии).
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 7218—2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ Р ИСО 11133-1—2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории
ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред
ГОСТ Р 50396.0—92 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям
ГОСТ Р 52816—2007 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
ГОСТ Р 53597—2009 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям
ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019—79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 10444.1—84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ 26669—85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26670—91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов ГОСТ 29184—91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
ГОСТ 30425—97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей згу ссылку.
3 Термины, определения и сокращения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52816, а также следующие сокращения.
НВЧ — наиболее вероятное число;
КОЕ — колониеобразующие единицы;
БГКП — бактерии группы кишечных палочек.
4 Сущность методов
Метод выявления колиформных бактерий основан на высеве определенного количества продукта и (или) его разведения в жидкую среду с лактозой, термостатировании при температуре (37 ± 1) °С в течение (48 ± 2) ч. подтверждении принадлежности, при необходимости, выросших микроорганизмов по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам к колиформным бактериям.
Метод определения количества колиформных бактерий методом Н8Ч основан на высеве определенного количества продукта и (или) его последовательных разведений в жидкую селективную среду с лактозой; термостатировании. учете положительных пробирок, подтверждении принадлежности, при необходимости, по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам выросших микроорганизмов к колиформным бактериям. Метод определения наиболее вероятного числа колиформных бактерий предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см 3 жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.
Методы определения количества колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его последовательных разведений в/на агариэованную селективно-диагностическую среду с лактозой, термостатировании. подсчете типичных и атипичных колоний, подтверждении принадлежности по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам выросших микроорганизмов к колиформным бактериям.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агариэованные селективно-диагностические среды предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 или в 1 см 3 жидкого продукта более 15 колокиеобраэующих единиц колиформных бактерий.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агариэованные селективно-диагностические среды предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см 3 жидкого продукта более 150 колониеобраэующих единиц колиформных бактерий.
5 Общие положения
5.1 Общие требования к проведению микробиологических исследований — поГОСТРИС0 7218.
5.2 Требования безопасности
Требования безопасности при работе с микроорганизмами — по ГОСТ Р ИСО 7218, с химическими реактивами — по ГОСТ 12.1.007. с электрооборудованием — по ГОСТ 12.1.019.
Требования пожарной безопасности — по ГОСТ 12.1.004.
5.3 Требования к персоналу — по ГОСТ Р ИСО 7218.
6 Средства измерений, аппаратура, материалы, культуральные среды
и реактивы
6.1 Средства измерений, аппаратура, материалы, культуральные среды и реактивы —по ГОСТ Р 50396.0. ГОСТ Р 53597. ГОСТ Р ИСО 7218. ГОСТ Р 52816.
6.2 Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также материалов, реактивов, по качеству не ниже указанных в 6.1.
7 Подготовка к проведению испытаний
7.1 Отбор и подготовка проб
Отбор и подготовка проб — по ГОСТ Р 50396.0. ГОСТ Р 53597, ГОСТ Р ИСО 7218.
7.2 Приготовление разведений из пробы для анализа — по ГОСТ Р ИСО 7218. ГОСТ 26669.
7.3 Подготовка средств измерений, аппаратуры, оборудования, посуды и материалов — по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р ИСО 7218.
7.4 Подготовка и приготовление культуральных сред, растворов реактивов
Общие указания по приготовлению культуральных сред — по ГОСТ Р ИСО 11133*1.
7.4.1 Селективная обогатительная среда (лаурил сульфат триптозный бульон) по ГОСТ Р 52816.
7.4.2 Бульон лактоэный с бриллиантовым зеленым и желчью по ГОСТ Р 50396.0. ГОСТ Р 52816.
7.4.3 Селективная обогатительная среда (бульон Мак*Конки) по ГОСТ Р 52816.
7.4.4 Среда Кесслера с лактозой по ГОСТ Р 50396.0. ГОСТ Р 52816.
7.4.5 Среда Хейфица по ГОСТ Р 50396.0.
7.4.6 Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактоэный агар (VRBL-arap) по ГОСТ Р 52816.
7.4.7 Агар лактоэный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным по ГОСТ Р 52816.
7.4.8 Среда Эндо по ГОСТ Р 50396.0.
7.4.9 Среда Гисса с лактозой по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ 10444.1.
7.4.10 ГРМ-arap (сухой питательный агар на основе гидролизата рыбной муки для культивирова* мия бактерий) по ГОСТ Р 52816.
7.4.11 Мясо-пептонный агар по ГОСТ Р 50396.0.
7.4.12 Реактивы для окраски по Граму по ГОСТ 10444.1.
7.4.13 Диски индикаторные бумажные для определения оксидазы.
7.4.14 Реактивы для теста Григорсена по ГОСТ Р 52816.
7.4.15 Допускается использование других культуральных селективно-диагностических сред, в том числе хромогенных, разрешенных и предназначенных для выявления и определения колиформных бактерий.
7.4.16 Приготовление и правила использования культуральных сред промышленного производства проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-2.
7.4.17 Методы контроля культуральных сред — по ГОСТ Р ИСО 11133*1.
7.4.18 Сроки и условия хранения культуральных сред — по ГОСТ Р ИСО 11133*1.
8 Проведение испытаний
8.1 Метод выявления колиформных бактерий — по ГОСТ Р 52816 (подраздел 9.1).
8.1.1 Оценка и выражение результатов
Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
Пробирки с посевами, в которых отмечен рост микроорганизмов (помутнение среды), образование газа (наличие пузырьков газа в поплавках) и кислоты (изменение цвета среды), считают положительными. и обнаруженные микроорганизмы относятся к колиформным бактериям.
При выявлении колиформных бактерий отмечают присутствие или отсутствие их в Хг или в Хсм продукта.
Результаты исследований записывают как «БГКП обнаружены или не обнаружены в Хг (см ) продукта».
8.1.2 Дополнительное подтверждение принадлежности выявленных бактерий к колиформ-кым бактериям
8.1.2.1 Выделение чистой культуры на дифференциально-диагностических агаризоеанных средах и идентификация
При необходимости для дополнительного подтверждения принадлежности выявленных бактерий, выросших на жидких средах с образованием газа, к колиформным бактериям проводят пересевы для получения изолированных колоний по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ 26670 штрихом на поверхность одной из селективно-диагностических сред: VRDL-агар (см. 7.4.6). агар лактоэный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным (см. 7.4.7), среда Эндо (см. 7.4.8). Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 2) ч и отмечают рост типичных и атипичных колоний.
Типичные колонии колиформных бактерий.
• на VRBL-arape — пурпурно*красные колонии диаметром не менее 0.5 мм. иногда окружены крас* новатой зоной преципитата (осадка) желчи;
• агаре лактозном с бриллиантовым зеленым и феноловым красным — зеленоватые колонии, окруженные яркой желто*зеленой зоной;
. среде Эндо — красные, розовые, бледно-розовые колонии, часто с металлическим блеском.
Атипичные колонии отличаются от типичных по цвету и размеру колоний.
8.1.2.2 Для дополнительного подтверждения отбирают не менее чем по пять типичных и атипичных колоний из чашек Петри с посевами (см. 8.12. 1).
Атипичные колонии отбирают только те. в которых подтверждено наличие колиформных бактерий посевом в жидкую подтверждающую среду.
Каждую отобранную колонию пересевают на поверхность скошенного питательного агара (см. 7.4.10,7.4.11). Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) в С в течение (24 ±2) ч.
Принадлежность выросших бактерий к колиформным бактериям определяют по отношению к окраске по Граму, по отсутствию оксидаэы и по ферментации лактозы.
8.1.2.3 Окраска по Граму
Из подготовленных культур (см. 8.1.2.2) готовят мазки и окрашивают по Граму по ГОСТ 30425.
Допускается окраску по Граму заменять тестом Грегорсена по ГОСТ Р 52818.
8.1.2.4 Определение отсутствия оксидаэы
Определение отсутствия оксидаэы проводят по ГОСТ 29184.
Допускается использование дисков промышленного производства для определения оксидаэы (см. 7.4.13).
8.1.2.5 Определение ферментации лактозы
Определение ферментации лактозы проводят по ГОСТ Р 52818.
8.1.2.6 Оценка результатов дополнительного подтверждения принадлежности выявленных бакте* рий к колиформным бактериям
По результатам дополнительного подтверждения к колиформным бактериям относят аэробные и факультативно-анаэробные не образующие спор грамотрицательные оксидазоотрицагельные палочки, способные ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа.
8.2 Определение количества колиформных бактерий
8.2.1 Определение количества колиформных бактерий методом НВЧ — по ГОСТ Р 52816.
Результаты выражают как «НВЧ колиформных бактерий в 1 г (см 3 ) продукта».
8.2.2 Определение количества колиформных бактерий методом посева в/на агаризован* ные селективно-диагностические среды
8.2.2.1 Подготовка к проведению исследований — по разделу 7.
8 2.2.2 Отбор и подготовка проб — по 7.1.
8.2.2.3 Приготовление разведений — по 7.2.
8.2.2.4 Посев —по ГОСТ Р 52816.
8.2.2.5 Термостатирование — по ГОСТ Р 52816.
8.2.2.6 Подсчет количества колоний по ГОСТ Р 52816.
8.2.2.7 Подтверждение принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям
Для подтверждения принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям отбирают не менее чем по пять типичных и атипичных колоний. Каждую отобранную колонию пересевают в пробирку с одной из жидких питательных сред (см. 7.4.2—7.4.5). Проведение подтверждения принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям — по 8.1.1.
Оценка и выражение результатов по проведенному подтверждению — по 8.1.2.
в.2.2.8 Подсчет и выражение результатов
Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
В случае, когда не менее чем в четырех из пяти типичных и атипичных колоний подтвержден рост колиформных бактерий (не менее 80 %) считают, что все колонии принадлежат к колиформным бактериям. В остальных случаях количество колиформных бактерий определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству колоний, взятых для подтверждения.
Расчет количества колиформных бактерий, определенного посевом в/на агаризоеакные селективно-диагностические среды, на 1 г (см 3 ) продукта проводят по ГОСТ Р И СО 7218. ГОСТ 26670.
Результаты определения количества колиформных бактерий в пробе продукта выражают и записывают по ГОСТ Р ИСО 7218. ГОСТ 26670.
УДК 663/664:543:006.354 ОКС 67.120.20 Н19 ОКСТУ 9209
Ключевые слова: мясо птицы, субпродукты, полуфабрикаты, колиформные бактерии, разведение про* дукта. культуральные среды, отбор проб, посев, термостатирование. типичные и атипичные колонии, наиболее вероятное число (НВЧ)
Редактор Л.В Корстникоеа Технический редактор И.С. Грошеноеа Корректор 8.4. Варенцоея Компьютерная верстка В.И. Грищенко
Сдано е набор 27.02.2012. Подписано в печать 06.03.2012 Формат 60×647». Гарнитура Ариел. Уел. печ. л. 0.93.
Уч.-иад. п. 0.65 Тираж 206 эка. Зак. 213.
. 123005 Москва. Гранатный лер.. 4 «vww.poitrifo.ru info£goitinfo.iu Набрано во на ПЭВМ
Отпечатано е филиале — тип. «Московский печатник», 106062 Москва. Лялин пер.. 6.